Рибофлавін входить як кофактор до багатьох дихальних ферментів (флавопротеїнів), що беруть участь в енергетичному обміні. Рибофлавін потрібний для синтезу білків і ліпідів, відіграє певну роль у біохімії зорового сприйняття. Через недостатність у їжі рибофлавіну розвивається гіпорибофлавіноз.

Найхарактернішим симптомом гіпофлавінозу є хейлоз, що виявляється зміною слизової оболонки в кутах рота і ділянках шкіри, які прилягають до нього, а також появою на крилах носа, за вухами себорейної екземи. Згодом розвиваються зміни з боку очей — світлобоязнь, сльозотеча, кератит. Інколи спостерігаються посилене випадання волосся, порушення гемопоезу, поява червонуватих плям на шкірі, на місці яких розвивається десквамація. Проте вираженого синдрому недостатності рибофлавіну, як при бері-бері або пелагрі, не спостерігається.

Джерелами рибофлавіну є печінка, серце, жовтки яєць, бобові, м'ясо, злакові, молоко, особливо багаті на нього пивні дріжджі. Слід зауважити, що в більшості цих продуктів рівень рибофлавіну невисокий. Оптимальна потреба дорослої людини в рибофлавіні становить 1,5—2 мг на добу.

Про забезпечення організму рибофлавіном можна судити за виведенням його із сечею.